Comparative study of sickle cell anemia and hemoglobin SC disease: clinical characterization, laboratory biomarkers and genetic profiles.

BACKGROUND: In this study, we evaluate the association of different clinical profiles, laboratory and genetic biomarkers in patients with sickle cell anemia (SCA) and hemoglobin SC disease (HbSC) in attempt to characterize the sickle cell disease (SCD) genotypes. METHODS: We conducted a cross-sectional study from 2013 to 2014 in 200 SCD individuals (141 with SCA; 59 with HbSC) and analyzed demographic data to characterize the study population. In addition, we determined the association of hematological, biochemical and genetic markers including the ßS-globin gene haplotypes and the 3.7 Kb deletion of α-thalassemia (-α3.7Kb-thal), as well as the occurrence of clinical events in both SCD genotypes. RESULTS: Laboratory parameters showed a hemolytic profile associated with endothelial dysfunction in SCA individuals; however, the HbSC genotype was more associated with increased blood viscosity and inflammatory conditions. The BEN haplotype was the most frequently observed and was associated with elevated fetal hemoglobin (HbF) and low S hemoglobin (HbS). The -α3.7Kb-thal prevalence was 0.09 (9%), and it was associated with elevated hemoglobin and hematocrit concentrations. Clinical events were more frequent in SCA patients. CONCLUSIONS: Our data emphasize the differences between SCA and HbSC patients based on laboratory parameters and the clinical and genetic profile of both genotypes.

Association of classical markers and establishment of the dyslipidemic sub-phenotype of sickle cell anemia.

BACKGROUND: Sickle cell anemia (SCA) patients exhibit sub-phenotypes associated to hemolysis and vaso-occlusion. The disease has a chronic inflammatory nature that has been also associated to alterations in the lipid profile. This study aims to analyze hematological and biochemical parameters to provide knowledge about the SCA sub-phenotypes previously described and suggest a dyslipidemic sub-phenotype. METHODS: A cross-sectional study was conducted from 2013 to 2014, and 99 SCA patients in steady state were enrolled. We assessed correlations and associations with hematological and biochemical data and investigated the co-inheritance of -α3.7Kb-thalassemia (-α3.7Kb-thal). Correlation analyses were performed using Spearman and Pearson coefficient. The median of quantitative variables between two groups was compared using t-test and Mann-Whitney. P-values <0.05 were considered statistically significant. RESULTS: We found significant association of high lactate dehydrogenase levels with decreased red blood cell count and hematocrit as well as high levels of total and indirect bilirubin. SCA patients with low nitric oxide metabolites had high total cholesterol, high-density lipoprotein cholesterol, and low-density lipoprotein cholesterol and reduced very low-density cholesterol, triglycerides, direct bilirubin level and reticulocyte counts. In SCA patients with high-density lipoprotein cholesterol greater than 40 mg/dL, we observed increased red blood cell count, hemoglobin, hematocrit, and fetal hemoglobin and decreased nitric oxide metabolites levels. The presence of -α3.7Kb-thal was associated with high red blood cell count and low mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, platelet count and total and indirect bilirubin levels. CONCLUSIONS: Our results provide additional information about the association between biomarkers and co-inheritance of -α3.7Kb-thal in SCA, and suggest the role of dyslipidemia and nitric oxide metabolites in the characterization of this sub-phenotype.

The DAU Allele and Anti-D Alloimmunization Present With High Frequency in Brazilian Sickle Cell Disease Patients.

BACKGROUND: Antigens DIIIa, DAR and DAU are common in people of African descent and are involved in anti-D alloimmunization. Sickle cell disease (SCD) patients frequently need blood therapy and are vulnerable to alloimmunization. METHODS: The study included SCD patients from the Brazilian state of Bahia, which has the highest incidence of the disease in Brazil; 241 SCD patients and 220 healthy individuals were studied. Alleles were characterized by PCR-RFLP and PCR-SSP techniques. RESULTS: The DAU allele was found in 22.3% (43/193) of the SCD patients. Two (1%) patients had the DIIIa/D wild-type genotype, one (0.5%) had the DIIIa/D- genotype, 11 (5.7%) had the DAR/D wild-type genotype and three (1.6%) had the DAR/D- genotype. Two patients were positive for the 667T>G mutation and the 1136C>T mutation, one (0.5%) had the genotype DIIIa/DAU, and one (0.5%) had the genotype DAR/DAU. CONCLUSION: There was statistical significance when the allele frequencies were evaluated among SCD, sickle cell anemia (HbSS) patients and healthy individuals. The frequencies of the DIIIa, DAR and DAU alleles among SCD patients differ from those of healthy individuals from the same population, and a high frequency of the DAU variant was associated with anti-D alloimmunization in these patients.

Chromosomal abnormalities in couples with recurrent first trimester abortions.

PURPOSE: To investigate the prevalence of chromosomal abnormalities in couples with two or more recurrent first trimester miscarriages of unknown cause. METHODS: The study was conducted on 151 women and 94 partners who had an obstetrical history of two or more consecutive first trimester abortions (1-12 weeks of gestation). The controls were 100 healthy women without a history of pregnancy loss. Chromosomal analysis was performed on peripheral blood lymphocytes cultured for 72 hours, using Trypsin-Giemsa (GTG) banding. In all cases, at least 30 metaphases were analyzed and 2 karyotypes were prepared, using light microscopy. The statistical analysis was performed using the Student t-test for normally distributed data and the Mann-Whitney test for non-parametric data. The Kruskal-Wallis test or Analysis of Variance was used to compare the mean values between three or more groups. The software used was Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), version 17.0. RESULTS: The frequency of chromosomal abnormalities in women with recurrent miscarriages was 7.3%, including 4.7% with X-chromosome mosaicism, 2% with reciprocal translocations and 0.6% with Robertsonian translocations. A total of 2.1% of the partners of women with recurrent miscarriages had chromosomal abnormalities, including 1% with X-chromosome mosaicism and 1% with inversions. Among the controls, 1% had mosaicism. CONCLUSION: An association between chromosomal abnormalities and recurrent miscarriage in the first trimester of pregnancy (OR=7.7; 95%CI 1.2--170.5) was observed in the present study. Etiologic identification of genetic factors represents important clinical information for genetic counseling and orientation of the couple about the risk for future pregnancies and decreases the number of investigations needed to elucidate the possible causes of miscarriages.

Chromosomal abnormalities in couples with recurrent first trimester abortions / Alterações cromossômicas em casais com aborto recorrente de primeiro trimestre

PURPOSE: To investigate the prevalence of chromosomal abnormalities in couples with two or more recurrent first trimester miscarriages of unknown cause. METHODS: The study was conducted on 151 women and 94 partners who had an obstetrical history of two or more consecutive first trimester abortions (1-12 weeks of gestation). The controls were 100 healthy women without a history of pregnancy loss. Chromosomal analysis was performed on peripheral blood lymphocytes cultured for 72 hours, using Trypsin-Giemsa (GTG) banding. In all cases, at least 30 metaphases were analyzed and 2 karyotypes were prepared, using light microscopy. The statistical analysis was performed using the Student t-test for normally distributed data and the Mann-Whitney test for non-parametric data. The Kruskal-Wallis test or Analysis of Variance was used to compare the mean values between three or more groups. The software used was Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), version 17.0. RESULTS: The frequency of chromosomal abnormalities in women with recurrent miscarriages was 7.3%, including 4.7% with X-chromosome mosaicism, 2% with reciprocal translocations and 0.6% with Robertsonian translocations. A total of 2.1% of the partners of women with recurrent miscarriages had chromosomal abnormalities, including 1% with X-chromosome mosaicism and 1% with inversions. Among the controls, 1% had mosaicism. CONCLUSION: An association between chromosomal abnormalities and recurrent miscarriage in the first trimester of pregnancy (OR=7.7; 95%CI 1.2--170.5) was observed in the present study. Etiologic identification of genetic factors represents important clinical information for genetic counseling and orientation of the couple about the risk for future pregnancies and decreases the number of investigations needed to elucidate the possible causes of miscarriages. .

OBJETIVO: Determinar a prevalência de alterações cromossômicas em casais com dois ou mais abortos recorrentes do primeiro trimestre, sem causa definida. MÉTODOS: Foram incluídas 151 mulheres e 94 parceiros com história obstétrica de 2 ou mais abortos consecutivos de 1º trimestre (1-12 semanas de gestação). Os controles foram 100 mulheres saudáveis, sem histórico de perda da gravidez. A análise cromossômica foi realizada em linfócitos de sangue periférico, cultivados 72 horas e tratados com a técnica Tripsina-Giemsa (GTG banda). Em todos os casos, foram analisadas 30 metáfases e montados 2 cariótipos, sendo utilizada microscopia de luz. A análise estatística foi realizada por meio do teste t de Student para dados com distribuição normal e o teste Mann-Whitney para os dados não paramétricos. Foi usado o teste de Kruskal-Wallis ou Análise de Variância para comparação dos valores médios entre três ou mais grupos. O software utilizado foi o Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), versão 17.0. RESULTADOS: A frequência de alterações cromossômicas das mulheres com aborto recorrente foi de 7,3%, incluindo 4,7% com mosaicismo do cromossomo X, 2% com translocações recíprocas e 0,6% com translocações Robertsonianas. No total, 2,1% dos parceiros das mulheres com abortos recorrentes tinham anormalidades cromossômicas, sendo 1% com mosaicismo do cromossomo X e 1% com inversões. Entre os controles, 1% apresentou mosaicismo. CONCLUSÃO: No presente estudo, foi observada associação entre alterações cromossômicas e aborto recorrente no primeiro trimestre da gestação (OR=7,7; IC95% 1,2-170,5). A identificação etiológica de fatores genéticos é uma informação ...

Inflamação, hemólise e ativação celular: importância nos eventos vasculares da anemia falciforme / Inflammation, cellular activation and hemolysis: importance in vascular events of sickle cell anemia

A anemia falciforme (AF) é uma desordem genética caracterizada por hemólise, estresse oxidativo, infecções recorrentes, estado inflamatório crônico e eventos de oclusão vascular, com ocorrência de crises de dor, danos teciduais e possibilidade de óbito precoce. Os eventos vasculares na AF envolvem a participação de hemácias, leucócitos, células endoteliais, plaquetas, fatores da coagulação e proteínas plasmáticas. Neste estudo, avaliou-se o papel de marcadores hematológicos, de hemólise, inflamação e de ativação celular na fisiopatologia da ativação endotelial na AF. Foi realizado um estudo de corte transversal, seguido por caso controle. Quarenta e cinco (45) indivíduos com AF em estado estável, com idade média 20,5 anos participaram do estudo. O perfil de hemoglobinas foi confirmado por HPLC. Os marcadores bioquímicos foram investigados por kits específicos; a expressão de moléculas na superfície dos leucócitos por citometria de fluxo e a quantificação de citocinas e moléculas de adesão solúveis por ELISA. Níveis elevados de lactato desidrogenase (LDH) e bilirrubinas foram associados a eventos de Síndrome Torácica Aguda e úlcera de perna, respectivamente. A leucocitose foi observada em pacientes com histórico de hepatomegalia e úlcera de perna. Os pacientes com histórico de terapia transfusional apresentaram concentrações aumentadas da aspartato aminotransferase (AST) e contagem de reticulócitos. Os níveis diminuídos de HDL estiveram associados a eventos de sequestro esplênico e esplenomegalia. A expressão do CD11b em neutrófilos, linfócitos e monócitos foi maior nos pacientes que nos controles; entretanto, a expressão do CD62L nos neutrófilos foi menor nos pacientes do que nos controles antes e após o desafio com o lipopolissacarídeo bacteriano (LPS). A expressão do CD11b e CD32 em neutrófilos teve correlação positiva com plaquetas e com o LDL, respectivamente. A expressão do CD62L em neutrófilos apresentou correlação negativa com plaquetas. A expressão do CD11b e CD18 em linfócitos teve correlação positiva com o ácido úrico e com a molécula de adesão vascular solúvel 1 (VCAM-1s), respectivamente. A expressão do CD62L em linfócitos foi negativamente correlacionada com o número de plaquetas, molécula de adesão intercelular solúvel 1 (ICAM-1s) e TNF-alfa. A expressão do CD32 em monócitos foi menor nos pacientes que nos controles e apresentou correlação negativa com a AST e hemoglobina S. A expressão reduzida do CD32 em monócitos de pacientes foi associada ao aumento da LDH, enquanto que a expressão do CD62L nessas células apresentou correlação positiva com o HDL e com as concentrações de hemoglobina. Os níveis de IL-18 e do ácido úrico foram associados a marcadores de hemólise, de disfunção endotelial e citocinas e podem representar a participação do complexo inflammasome. Os resultados apresentados sugerem o papel importante de biomarcadores na avaliação do perfil clínico de pacientes com AF, além de sugerir a provável influência de moléculas expressas na superfície de leucócitos, da IL-18 e do ácido úrico no processo inflamatório crônico e na gravidade clínica da AF. Acreditamos que a interação desses biomarcadores envolve processos complexos relacionados à hemólise, inflamação e ativação celular com importância na avaliação da gravidade dos eventos vasculares presentes na AF. Em conjunto, todos esses marcadores podem ser considerados como alvos terapêuticos promissores em intervenções clínicas futuras na doença.

Anemia falciforme: polimorfismos gênios em moléculas de adesão (VCAM-1 e ICAM-1), TNF-ALFA-, IL-8 e alterações fonotípicas / Sickle cell anemia: polymorphisms geniuses in molecules of accession (VCAM-1 and ICAM-1), TNF-ALPHA-, IL-8 and amendments fonotípicas

A hemoglobina S é resultado da mutação pontual A>T no sexto códon do gene beta da globina, conduzindo à substituição do ácido glutâmico pela valina na cadeia da globina beta. A anemia falciforme apresenta heterogeneidade clinica, com a gravidade variável atribuída ao pleiotropismo gênico dos pacientes. Logo, alguns pacientes apresentam alterações gênicas variadas que podem refletir na melhora ou não do fenótipo apresentado. O estudo investigou polimorfismos gênicos em moléculas de adesão (VCAM-1 e ICAM-1) e citocinas (TNF-alfa e IL-8) correlacionando-os aos níveis séricos das citocinas, parâmetros hematológicos e manifestações clinicas apresentadas em um grupo de pacientes pediátricos com anemia falciforme em Salvador-Bahia. No estudo foram investigados 125 pacientes pediátricos com anemia falciforme e 212 indivíduos sadios da população de Salvador. Os polimorfismos gênicos foram investigados por PCR-RFLP. Os níveis séricos das citocinas foram avaliados por ELlSA. As análises estatísticas foram realizadas pelo programa EPI-INFO versão 6.04 e a significância foi estabelecida para p < 0,05. Do total de 125 pacientes analisados, 27 (22 por cento) foram heterozigotos para o polimorfismo -833 na região promotora do gene da VCAM-1; 15 (12 por cento) foram heterozigotos para o polimorfismo 1238 no gene da VCAM-1; 50 (40 por cento) foram heterozigotos e oito (2 por cento) homozigotos para o polimorfismo 469 no gene da ICAM-1; 30 (24 por cento) foram heterozigotos e dois (2 por cento) homozigotos para o polimorfismo -308 na região promotora do gene do TNF-alfa; 66(53 por cento) foram heterozigotos e 43 (34 por cento) homozigotos para o polimorfismo -251 na região promotora do gene da IL-8. Nossos resultados demonstraram que não houve associação estatística entre os polimorfismos -308 na região promotora do gene do TNF-alfa e -251 na região promotora do gene da IL-8 e os níveis séricos das citocinas...